Paano Gumawa ng Phosphate Buffered Saline (PBS)

Ang phosphate buffered saline (PBS) ay isang solusyon ng buffer na karaniwang ginagamit para sa pag-iimbak ng immunohistochemical (IHC) at madalas itong ginagamit sa biological na pananaliksik. Ang PBS ay isang tubig-based na asin solusyon na naglalaman ng sosa hydrogen pospeyt, sosa klorido at, sa ilang mga kaso, potasa klorido at potasa dihydrogen pospeyt.

Immunohistochemical Staining

Ang immunohistochemistry ay tumutukoy sa proseso ng pagtuklas ng mga antigen tulad ng mga protina sa mga selula ng seksyon ng tissue sa pamamagitan ng paggamit ng prinsipyo ng antibodies na umiiral na partikular sa mga antigens sa biological tissues. Immunofluorescent staining ay ang unang immunohistochemical staining method.

Ang mga antigens ay nakikita kapag conjugated sa mga antibodies gamit ang pag-ilaw tina dahil sa isang antigen-antibody umiiral reaksyon. Ang prosesong ito ay nangyayari kapag aktibo ito sa pamamagitan ng kapana-panabik na liwanag ng isang tiyak na haba ng daluyong sa ilalim ng isang fluorescent microscope.

Ang osmolarity at ion concentrations ng mga solusyon ay tumutugma sa mga katawan ng tao-sila ay isotonic.

Isang Recipe para sa PBS Buffer

Maaari kang maghanda ng PBS sa maraming paraan. Maraming mga formula. Ang ilan sa kanila ay hindi naglalaman ng potasa, habang ang iba ay naglalaman ng calcium o magnesium.

Ang recipe na ito ay medyo madali. Ito ay para sa 10X PBS stock solusyon (0.1M). Gayunpaman, maaari ka ring gumawa ng 1X stock solution, o magsimula sa recipe ng 10X na ito at palabnawin ito sa 1X. Ang buong proseso ay tumatagal ng mga 10 minuto at isang pagpipilian upang idagdag ang Tween ay ibinigay din.

Ano ang Kailangan mong Gumawa ng PBS Buffer

• Sosa pospeyt monobasiko (walang tubig)
• Sosa pospeyt dibasic (anhydrous)
• Sosa klorido
• Scale at timbangin ang mga bangka
• Magnetic stirrer at stir bar
• Isang pH probe na naka-calibrate at angkop na mga solusyon para sa pag-aayos ng pH
• 1L volumetric flask
• Tween 20 (opsyonal)

Paano Gumawa ng PBS Buffer

1. Ihambing ang 10.9g anhydrous sodium phosphate dibasic (Na2HPO4), 3.2g anhydrous sodium phosphate monobasic (NaH2PO4), at 90g sodium chloride (NaCl). Dissolve sa ilalim lamang ng 1L distilled water.
2. Ayusin ang pH sa 7.4 at gawin ang solusyon hanggang sa isang huling dami ng 1L.
3. Dilaw 10X bago magamit at ayusin ang pH kung kinakailangan.
4. Maaari kang gumawa ng isang PBS solusyon na naglalaman ng 0.5 porsiyento Tween 20 sa pamamagitan ng pagdaragdag ng 5mL Tween 20 sa 1L solusyon.

Mga Tip para sa Paggawa ng PBS Buffer

Iimbak ang buffer sa temperatura ng kuwarto pagkatapos mong magawa ang PBS solution.

Ang non-anhydrous reagents ay maaaring palitan ngunit kakailanganin mong muling kalkulahin ang naaangkop na masa ng bawat isa upang mapaunlakan ang idinagdag na mga molecule ng tubig.

Gumagamit ng PBS Buffer

Ang phosphate buffered saline ay maraming gamit sapagkat ito ay isotonic at hindi nakakalason sa karamihan ng mga selula. Maaari itong gamitin upang palabnawin ang mga sangkap at kadalasang ginagamit upang banlawan ang mga lalagyan ng mga cell. PBS ay maaaring gamitin bilang isang dilutent sa iba't ibang mga paraan upang matuyo biomolecules dahil ang mga molecule ng tubig sa loob nito ay nakabalangkas sa paligid ng mga substance-protina, halimbawa. Ito ay "pinatuyong" at inililipat sa isang matatag na ibabaw.

Ang pH ay mananatiling matatag at pare-pareho upang pigilan ang pagkawasak ng mga selula.

Ang manipis na film ng tubig na nagbubuklod sa sangkap ay pinipigilan ang denaturation o iba pang mga pagbabago na conformational. Ang mga buffer ng karbon ay maaaring gamitin para sa parehong layunin ngunit mas mababa ang pagiging epektibo.

PBS ay maaari ding gamitin upang kumuha ng isang reference spectrum kapag pagsukat ng protina adsorption sa ellipsometry.