Paano Gumawa ng TBE Buffer sa 3 Madali na Mga Hakbang

Ang TBE buffer ay isang buffer solution na binubuo ng Tris base, boric acid at EDTA (o Tris-borate-EDTA kabuuan). Ang buffer na ito ay kadalasang ginagamit para sa agarose gel electrophoresis sa pag-aaral ng mga produktong DNA na nagreresulta mula sa paglaki ng PCR, protocol ng paglilinis ng DNA o mga eksperimento ng DNA cloning.

Ang TBE buffer ay partikular na kapaki-pakinabang para sa paghihiwalay ng mas maliit na fragment ng DNA (MW <1000), tulad ng mga maliliit na produkto ng mga digestive enzyme na pagbabawas. Ang TBE ay may mas malaking kapasidad na buffering at magbibigay ng mas matalas na resolusyon kaysa sa TAE buffer. TAE buffer ay isang solusyon na binubuo ng Tris base, acetic acid at EDTA (Tris-acetate-EDTA).

Ang TBE sa pangkalahatan ay mas mahal kaysa sa TAE at inhibits DNA ligase, na maaaring maging sanhi ng mga problema kung ang kasunod na paglilinis ng DNA at mga hakbang sa ligation ay inilaan. Sa tatlong simpleng hakbang na sumusunod, alamin kung paano gumawa ng TBE buffer. Hindi dapat tumagal ng higit sa 30 minuto upang malikha ang buffer na ito. Ganito:

Stock Solusyon ng EDTA

Ang isang EDTA (ethylenediamine tetraacetic acid) solusyon ay dapat na handa bago pa man. Ang EDTA ay hindi ganap na gagawin hanggang sa ang pH ay nababagay sa tungkol sa 8.0. Para sa 500-milliliter stock na solusyon ng 0.5 M EDTA, timbangin ang 93.05 gramo ng EDTA disodium salt (FW = 372.2). Pagkatapos ay ibuwag ito sa 400 milliliter deionized na tubig at ayusin ang pH na may NaOH. Pagkatapos nito, itaas ang solusyon sa isang pangwakas na dami ng 500 mililitro.

Stock Solution ng TBE

Gumawa ng isang konsentradong (5x) stock na solusyon ng TBE sa pamamagitan ng pagtimbang 54 g Tris base (FW = 121.14) at 27.5 g boric acid (FW = 61.83) at pagbubuwag sa dalawa sa humigit-kumulang na 900 mililiter ng deionized na tubig. Pagkatapos ay idagdag ang 20 milliliters ng 0.5 M EDTA (pH 8.0) at ayusin ang solusyon sa isang huling dami ng 1 litro. Ang solusyon na ito ay maaaring maimbak sa temperatura ng kuwarto ngunit ang isang namuo ay bubuo sa mas lumang mga solusyon. Iimbak ang buffer sa mga bote ng salamin at iwaksi kung nabuo ang isang namuo.

Paggawa ng Solusyon ng TBE

Para sa agarose gel electrophoresis, ang isang TBE buffer ay maaaring gamitin sa isang konsentrasyon ng 0.5x (1:10 pagbabanto ng puro stock). Dilaw ang solusyon ng stock sa pamamagitan ng 10x sa deionized water. Ang mga solute concentration ay 45 mM Tris-borate at 1 mM EDTA. Ang buffer ay handa na para gamitin sa pagpapatakbo ng isang agarose gel.

Ang iyong kailangan

Upang gumawa ng TBE buffer, kakailanganin mo ang apat na sangkap lamang. Ang mga natitirang item sa listahang ito ay kagamitan. Ang apat na sangkap na kailangan ay EDTA disodium salt, tris base, boric acid at deionized water.

Tulad ng para sa mga kagamitan, kakailanganin mo ng isang pH meter at mga pamantayan ng pagkakalibrate, kung naaangkop. Bukod sa na, kakailanganin mo ang 600-milliliter at 1500-milliliter beakers o flasks. Ang pag-ikot ng iyong mga pangangailangan sa kagamitan ay nagtatapos ng mga cylinder at gumalaw na mga bar at gumalaw ng mga plato.

Suriin ang imbentaryo sa lab na gagamitin mo upang matiyak na mayroon ka ng lahat ng kailangan mo bago ka magsimula. Wala nang mas masahol pa kaysa sa paghinto sa gitna ng paghahanda ng isang solusyon dahil naubusan ka ng tamang mga materyales. Kung ang iyong lab ay nasa paaralan o sa iyong site ng trabaho, suriin sa tamang tauhan upang makita na mayroon silang lahat ng mga item sa stock. Ang paggawa nito ay maaaring magligtas sa iyo ng oras at enerhiya sa dulo.