Paano I-freeze-Dry ng Bacterial Culture (Lyophilization)

Ang freeze-drying, na tinatawag ding lyophilization o cryodesiccation, ay ang proseso ng pag-alis ng tubig mula sa isang produkto pagkatapos na ito ay frozen (at pagkatapos ay ilagay sa ilalim ng vacuum) na nagpapahintulot sa yelo na baguhin mula sa isang solid sa isang singaw, nang walang paglipas ng isang likido phase. Ang yelo (o iba pang mga nakapirming solvents) ay inalis mula sa isang produkto sa pamamagitan ng proseso ng pangingimbabaw at nakatali na mga molecule ng tubig ay inalis sa pamamagitan ng proseso ng desorption.

Ang Mga Pangunahing Kaalaman ng Lyophilization

Ang isa sa mga pinakamahusay na paraan upang mag-imbak ng bacterial, fungal, lebadura o iba pang kultura ng mikroorganismo para sa matagal na panahon ay ang paggamit ng proseso ng freeze-drying. Ang maikling pamamaraan ng laboratoryo na ito ay maaaring isagawa sa anumang komersiyal na magagamit na freeze-dryer na magpapanatili sa iyong koleksyon ng kultura. Dahil ang lyophilization ay ang pinaka-kumplikado at mamahaling anyo ng pagpapatayo, ang proseso ay kadalasang pinaghihigpitan sa mga sensitibo, sensitibong materyal ng mataas na halaga. Ang mga sangkap na hindi napinsala sa pamamagitan ng pagyeyelo ay kadalasan ay maaaring lutuin upang ang imbakan ng imbakan ay hindi kinakailangan.

Ang prosesong ito ay maaaring tumagal ng kaunting tatlong oras, at hangga't 24 na oras, hindi kasama ang oras ng paglago ng kultura.

Ang Proseso ng Step-by-Step ng Lyophilization

1. Una, lumago ang isang kambal sa isang gabi, o damuhan, ng mikroorganismo sa LB o iba pang naaangkop na nutrient agar plate.
2. Susunod, maghanda ng sterile crimp-cap vials sa pamamagitan ng autoclaving maagang ng panahon, na may takip (goma stoppers) inilatag maluwag sa tuktok. Ilagay ang mga label ng papel na naka-print na may pagkakakilanlan ng kultura sa loob ng mga tubo bago ang autoclaving. Bilang kahalili, gumamit ng tubes na may mga takip na idinisenyo para sa sterility.
3. Magdagdag ng 4 mL lyophilization buffer sa plato. Kung kinakailangan, ang mga selula ay maaaring masuspinde gamit ang isang payat na baras ng salamin.

1. Mabilis na ilipat ang suspensyon ng kultura sa mga sterilized vials. Magdagdag ng humigit-kumulang 1.5 mL bawat maliit na bote. Seal sa goma cap.
2. I-freeze ang suspensyon sa kultura sa loob ng mga vial sa pamamagitan ng paglalagay ng mga vial sa isang -20 ° Celsius freezer.
3. Kapag ang mga kultura ay frozen, ihanda ang freeze-dryer sa pamamagitan ng pag-on ito at nagpapahintulot ng oras para sa naaangkop na temperatura at vacuum kondisyon upang patatagin. Gawin ito ayon sa mga tagubilin ng gumawa para sa partikular na tatak ng freeze-dryer na iyong ginagamit.
4. Maingat, at aseptically, ilagay ang maliit na kabibi caps maluwag sa tuktok ng vials, upang ang kahalumigmigan ay maaaring makatakas sa panahon ng freeze-pagpapatayo proseso, at ilagay ang mga vials sa isang silid-freeze-dryer kamara. Ilapat ang vacuum sa kamara ayon sa mga tagubilin ng tagagawa.
5. Pahintulutan ang oras ng kultura upang ganap na i-lyophilize (matuyo). Maaaring tumagal ito mula sa ilang oras hanggang sa magdamag depende sa lakas ng tunog ng bawat sample at kung gaano karaming mga halimbawa ang mayroon ka.
6. Tanggalin ang mga sample mula sa silid ng freeze-dryer ayon sa mga tagubilin ng tagagawa at agad na i-seal ang mga vial na may takip ng goma, pagkatapos ay ang mga lamat na tuktok.
7. I-imbak ang pagkolekta ng lyophilized na kultura sa temperatura ng kuwarto.

Mga Produkto na Kakailanganin mo

• Freeze-dryer
• Ang mga nakapagpapalusog o iba pang naaangkop na plato ng agar (at ang incubator upang palaguin ang kultura)
• Glass rod
• Buffer ng Lyophilization
• Mga butil-butil na mga butil na may mga stopper ng goma (at isang crimper na ilalapat ang mga takip)
• Freezer

_{Sanggunian:SP Scientific. Mga Pangunahing Prinsipyo ng Freeze Drying. http://www.spscientific.com/freeze-drying-lyophilization-basics/}